Columnas de inmunoafinidad: un cambio paso a paso en el análisis de micotoxinas
Nuevo artículo de nuestros amigos de R-Biopharm Rhone. Parece poco probable que la supremacía de los IAC sea desafiada en el futuro.
La disponibilidad de columnas comerciales de inmunoafinidad (IAC) para aflatoxinas hace unos 35 - 40 años representó un cambio paso a paso en cómo se podían analizar las micotoxinas en alimentos y productos agrícolas. El desarrollo de HPLC como herramienta cromatográfica de rutina en las pruebas de alimentos ocurrió durante el mismo período, con la limpieza de IAC seguida de la detección de fluorescencia LC que ofrece un método versátil, simple y preciso para determinar la aflatoxina B1 y las aflatoxinas totales. En marzo de 2001, la Comisión Europea estableció límites máximos para las aflatoxinas en los cacahuetes, los frutos secos, los frutos secos y los cereales, junto con un límite para la aflatoxina M1 en la leche (Reglamento CE no 466/2001). Esta regulación fue la fuerza impulsora para establecer "Métodos Oficiales" para las aflatoxinas, lo que requirió estudios colaborativos completos de métodos que involucraron un mínimo de al menos 8 laboratorios. Alrededor de los años 1998 - 2000 se llevaron a cabo estudios de colaboración internacional para proporcionar datos de validación completa para aflatoxinas en matrices como mantequilla de maní, pistachos, pasta de higo, pimentón y alimentos para bebés. (1) Estos métodos IAC fueron adoptados por AOAC International como métodos oficiales de Primera Acción (por ejemplo, (2) y más tarde por la Organización Europea (CEN) como Normas Europeas (por ejemplo, EN 14123:2007). R-Biopharm Rhône desempeñó un papel fundamental en estos estudios colaborativos al proporcionar IAC para los participantes del estudio y al participar como laboratorio en ensayos colaborativos. Los métodos oficiales estipulan especificaciones de rendimiento mínimo para los IAC, reconociendo que no todos los IAC son equivalentes, tienen diferentes anticuerpos y emplean diferentes tecnologías para construir columnas. Estos factores tienen una influencia importante en el rendimiento de la columna.
Desde los primeros días del análisis de aflatoxinas, las IAC comerciales han estado disponibles para otras micotoxinas como la ocratoxina A, el desoxinivalenol (DON), la zearalenona, las toxinas T-2 y HT-2, las fumonisinas, la esterigmatocistina y la citrinina. A medida que se han desarrollado los métodos, los reglamentos de la UE se han seguido actualizando aumentando el número de matrices con límites máximos, así como ampliando el rango de toxinas individuales. El último Reglamento (UE) 2023/915 (3) especifica niveles máximos de aflatoxinas, ocratoxina A, DON, zearalenona, fumonisinas y citrinina para los que están disponibles métodos IAC, además de límites para la patulina y los alcaloides de la ergot.
Los avances en los últimos años han incluido la automatización completa de los métodos IAC con cartuchos reutilizables (4). El desarrollo de IAC multimicotoxinas ahora permite la limpieza simultánea de varias toxinas diferentes. Un ejemplo es el R-Biopharm Rhône DZT MS-PREP®, que contiene anticuerpos monoclonales altamente específicos dirigidos contra las toxinas DON, zearalenona, T-2 y HT-2 (5) y 11+MYCO MS-PREP®, que recientemente ha recibido la certificación AOAC RI-112401 PTM (6) para un único método de extracción que detecta las micotoxinas legisladas clave en una amplia gama de matrices. A pesar de numerosas publicaciones que describen diferentes enfoques para la limpieza de micotoxinas y productos que van desde simples kits de prueba hasta biosensores de mano para el análisis de micotoxinas, parece poco probable que la supremacía de los IAC sea desafiada en el futuro. Hay una sofisticación considerable que sustenta la fabricación de IAC, pero desde la perspectiva del usuario, tienen una simplicidad y fiabilidad para la limpieza de muestras. En general, los IAC han resistido la "prueba del tiempo" y se ha demostrado que proporcionan resultados precisos, a límites muy bajos, independientemente de la complejidad de la matriz, que no puede ser igualada por otros enfoques.
Referencias
1-(https://doi.org/10.1093/jaoac/83.2.320)
2-(https://doi.org/10.1093/9780197610145.003.3986)
3-(https://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/PDF/? uri=CELEX:32023R0915)
4-(https://food.r-biopharm.com/products/ridacrest/)